Тимофей Спиридонович Изотов родился в 1875 году в Симферополе, в семье садовника. Образование он получил в церковноприходской школе, а к церковному служению пришёл поздно: псаломщиком в симферопольский кафедральный собор он поступил в 1909 году, когда ему было уже тридцать четыре.

В 1912 году за усердие его рукоположили в диакона, в 1916-м перевели в аутскую церковь Ялты, а в 1921-м — в симферопольский храм Всех святых. В 1922 году диакона Тимофея арестовали по делу об изъятии церковных ценностей, но за недостатком улик дело прекратили и его освободили.

В 1928 году он был рукоположен во священника и служил в селе Ново-Павловка, а с сентября 1936 года — в храме великомученика Феодора Стратилата в Алуште.

Зимой 1938 года власти попробовали развалить приходскую общину, уговорив нескольких человек выйти из неё. Община устояла, храм закрыть не удалось. Тогда 8 февраля 1938 года священника арестовали. Следствие заняло три дня. Отец Тимофей не стал ничего скрывать из того, что делал на самом деле: подтвердил, что крестил детей на квартире церковной старосты, что после обедни просил прихожан пополнить приходскую двадцатку и не дать общине развалиться, что служил и в день выборов — потому что таковы его обязанности. Остальное, что ему вменяли, он отверг.

15 февраля 1938 года тройка НКВД приговорила его к расстрелу. Священника Тимофея Изотова расстреляли в Симферополе и погребли в общей безвестной могиле. Память совершается 16 февраля.

Священномучеников по иконописному обычаю пишут в священническом облачении, с крестом в правой руке и Евангелием в левой; имя надписывают рядом с нимбом.